|
|
Vesicular roles of Arp2/3 nucleation-promoting factors
Dostál, Vojtěch ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Malínský, Jan (oponent) ; Befekadu, Asfaw (oponent)
F-aktin hraje klíčovou roli v různých aspektech vezikulárního transportu, jako je deformace membrány, tvorba tubulů a pohyb. Větvení F-aktinu je zajištěno komplexem Arp2/3, ten však musí být nejprve aktivován prostřednictvím tzv. nukleaci podporujících faktorů (NPF). Tyto faktory rozhodují o tom, kdy a kde by mělo dojít k tvorbě větveného F-aktinu na vnitřních membránách. Cílem této disertační práce je přispět k pochopení mechanismů, které řídí lokalizaci a aktivaci NPF v buňkách, především s důrazem na fosfoinositidové složení membrán váčků. Mé výsledky ukazují, že jeden z NPF, tzv. komplex WASH, není pro svou vazbu na membránu zcela odkázán na komplex retromeru, jak se původně předpokládalo. Komplex WASH se na membránu váže také pomocí své vlastní podjednotky SWIP. Kromě toho přináším nové informace o funkci komplexu WASH na lysosomech. Dále se věnuji funkci NPF známého jako WHAMM v kompartmentu ERGIC. Demonstruji, že schopnost proteinu WHAMM tvořit zde membránové tubuly závisí na přítomnosti myotubularinu 9. Práce jako celek přináší nové informace o procesech na rozhraní mezi aktinovým cytoskeletem a vnitrobuněčným membránovým systémem.
|
|
|
The role of the WASH complex in endolysosomal homeostasis
Beránková, Pavla ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Rösel, Daniel (oponent)
WASH (WASP and SCAR homologue) komplex je nukleační faktor pro aktin, který je nezbytný pro třídění karga v endosomech. Pokud dojde ke ztrátě WASH komplexu, náklad procházející endosomy ztrácí správnou lokalizaci a dochází ke kolapsu endolysosomálního systému. V této práci používáme vysokorychlostní sledování váčků a záchranu chybějícího WASH komplexu v reálném čase tak, abychom otestovali efekt jeho ztráty na homeostázu endolysosomálního systému. Zjistili jsme, že v buňkách s geneticky vyřazenými podjednotkami WASH komplexu dochází ke vzniku velkých vakuol podobných lysosomům. Zároveň ale záchranné experimenty nepotvrdily přímou roli WASH komplexu na vakuolách během toho, kdy se vakuoly vytrácely. Souhrnně naše data naznačují, že tvorba vakuol v buňkách s vyřazeným WASH komplexem je spíše druhotný proces, který je na WASH komplexu závislý pouze nepřímo.
|
|
|
Charakterizace proteinu SWIP, jednoho z členů WASH komplexu
Humhalová, Tereza ; Libusová, Lenka (vedoucí práce) ; Lánský, Zdeněk (oponent)
Komplex WASH reguluje dynamiku aktinové sítě na endozómech prostřednictvím aktivace komplexu Arp2/3, který nukleuje polymeraci větvených aktinových vláken. Pro správnou recyklaci řady důležitých transmembránových proteinů je komplex WASH nepostradatelný. Přestože obecná fyziologická funkce celého komplexu je známá, role jeho jednotlivých podjednotek stále ještě nejsou plně specifikovány. Tato práce se zabývá jednou z nich, proteinem SWIP. V hlence Dictyostelium discoideum je SWIP potřebný pro lokalizaci dalších podjednotek komplexu WASH na membrány váčků. Bodová mutace v proteinu SWIP způsobuje závažné neurodegenerativní onemocnění - autozomálně recesivní intelektuální poruchu (ARID). Z našich výsledků vyplývá, že zkrácení proteinu SWIP způsobuje jeho neschopnost vázat se do komplexu WASH, a že jeho C-koncová část je schopna lokalizovat na intracelulární váčky. Tato práce také ukazuje, že bodová mutace zapříčiňující ARID neovlivňuje schopnost vazby SWIPu do komplexu WASH, ani lokalizaci celého komplexu.
|
host ::
RSS.